इम्यूनोफ्लोरेसेंस

thumb|200px|right|मानव त्वचा के एक हिसटोलोजीकल खंड का माइक्रो फोटोग्राफ जो एक एंटी-IgA प्रतिरक्षी का उपयोग करके प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस के लिए तैयार है। यह त्वचा हेनोच-शॉनलेन पुर्पुरा से ग्रस्त एक रोगी का था: छोटे सतही कोशिका की दीवारों पर जमा IgA पाया जाता हैं। ऊपर पीला लहरदार हरा क्षेत्र अधिचर्म है, नीचे का रेशेदार क्षेत्र त्‍वचा है। thumb|200px|right|मानव त्वचा के एक हिसटोलोजीकल खंड का माइक्रो फोटोग्राफ जो एक एंटी-IgG प्रतिरक्षी का उपयोग करके प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस के लिए तैयार है। यह त्वचा सिस्टमिक ल्युपस एरिथेमाटोसस के रोगी का है और दो अलग-अलग स्थानों पर lgG का जमाव दिखाता है: पहला अधिचर्म भूतल झिल्ली के इर्द-गिर्द एक पट्टी जैसा जमाव ("ल्युपस बैंड परिक्षण" पोज़िटिव है).दूसरा अधिचर्म कोशिकाओं के न्युक्लिआइ के भीतर (एंटी-न्यूक्लियर प्रतिरक्षी). इम्यूनोफ्लोरेसेंस एक ऐसी तकनीक है जिसका उपयोग प्रकाश सूक्ष्मदर्शी के लिए प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी के साथ किया जाता है और इसका उपयोग प्रमुख रूप से जैविक नमूनों पर किया जाता है। यह तकनीक एक कोशिका के भीतर लक्षित विशेष बायोमोलिक्यूल को फ्लोरोसेंट रंजक को लक्षित करने के लिए अपने एंटीजेन के लिए प्रतिरक्षियों की विशिष्टता का उपयोग करता है और इसलिए नमूने के माध्यम से लक्ष्य अणु वितरण को देखना सम्भव बनाता है।Mandrell R. E. Griffiss J. M. Macher B. A. 1988-07-01 Lipooligosaccharides (LOS) of Neisseria gonorrhoeae and Neisseria meningitidis have components that are immunochemically similar to precursors of human blood group antigens. Carbohydrate sequence specificity of the mouse monoclonal antibodies that recognize crossreacting antigens on LOS and human erythrocytes. http://jem.rupress.org/content/168/1/107 Journal of Experimental Medicine en 168 1 107–126 10.1084/jem.168.1.107 0022-1007 2456365 16 मई 2018 https://web.archive.org/web/20190420194801/http://jem.rupress.org/content/168/1/107 20 अप्रैल 2019 dead एपिटॉप मैपिंग में भी प्रयास किए गए हैं क्योंकि कई एंटीबॉडी एक ही एपिटॉप से जुड़ सकते हैं और एक ही एपिटॉप पहचान सकने वाली एंटीबॉडी के बीच जुड़ाव के स्तर अलग-अलग हो सकते हैं।लेड्नर २००७-०१-०१ Mapping the Epitopes of Antibodies https://dx.doi.org/10.1080/02648725.2007.10648092 Biotechnology and Genetic Engineering Reviews. en २४ १-३० 16 मई 2018 https://web.archive.org/web/20200531013755/https://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/02648725.2007.10648092 31 मई 2020 live इसके अतिरिक्त, फ्लोरोफोर का एंटीबॉडी के साथ जुड़ना एंटीबॉडी की प्रतिरक्षा विशिष्टता या इसके एंटीजन से जुड़ने की क्षमता में हस्तक्षेप नहीं कर सकता है।https://www.worldcat.org/oclc/643714056 Immunofluorescence in medical science: with 28 tab. Kawamura Akiyoshi 1983 Springer u.a. 3540124837 Berlin u.a. en 16 मई 2018 https://web.archive.org/web/20200531013756/https://www.worldcat.org/title/immunofluorescence-in-medical-science-with-28-tab/oclc/643714056 31 मई 2020 live इम्यूनोफ्लोरेसेंस, इम्यूनोस्टेनिंग का व्यापक रूप से प्रयोग किया जाने वाला एक उदाहरण है और इम्युनोहिस्टोकेमिस्ट्री का एक विशिष्ट उदाहरण है जो प्रतिरक्षियों की स्थिति को देखने के लिए फ्लोरोफोरस का उपयोग करता है।http://www.protocol-online.org/prot/Immunology/Immunofluorescence/ इम्यूनोलॉजी/इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रोटोकॉल प्रोटोकॉल-ऑनलाइन.ओर्ग पर 4 जनवरी 2011 https://web.archive.org/web/20110305005622/http://www.protocol-online.org/prot/Immunology/Immunofluorescence/ 5 मार्च 2011 dead इम्यूनोफ्लोरेसेंस को ऊतक वर्गों, कल्चर किए हुए कोशिका रेखाओं, या व्यक्तिगत कोशिकाओं पर उपयोग किया जाता है और इसका उपयोग प्रोटीन, ग्लाईकन और छोटे जैविक और गैर जैविक अणुओं के वितरण का विश्लेषण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।Franke W W Schmid E Osborn M Weber K October 1978 Different intermediate-sized filaments distinguished by immunofluorescence microscopy. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC336257/ Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 75 10 5034–5038 0027-8424 368806 यदि कोशिका झिल्ली की टोपोलॉजी अभी तक निर्धारित नहीं की गई है, तो प्रोटीन में एपिटॉप सम्मिलन का उपयोग संरचनाओं को निर्धारित करने के लिए इम्यूनोफ्लोरेसेंस के संयोजन के साथ किया जा सकता है।Wang Honggang Lee Eun-Woo Cai Xiaokun Ni Zhanglin Zhou Lin Mao Qingcheng 2008-12-30 Membrane Topology of the Human Breast Cancer Resistance Protein (BCRP/ABCG2) Determined by Epitope Insertion and Immunofluorescence† https://dx.doi.org/10.1021/bi801644v Biochemistry EN 47 52 13778–13787 10.1021/bi801644v 0006-2960 PMC2649121 19063604 16 मई 2018 https://web.archive.org/web/20200531013755/https://pubs.acs.org/doi/10.1021/bi801644v 31 मई 2020 live इम्यूनोफ्लोरेसेंस का उपयोग डीएनए मिथाइलीकरण के स्तर और स्थानीयकरण पैटर्न में अंतर्दृष्टि प्राप्त करने के लिए "अर्ध-मात्रात्मक" विधि के रूप में भी किया जा सकता है क्योंकि यह वास्तविक मात्रात्मक तरीकों से अधिक समय लेने वाली विधि है और मिथाइलीकरण के स्तर के विश्लेषण में कुछ व्यक्तिपरकता है।2015-01-01 Understanding the complexity of antigen retrieval of DNA methylation for immunofluorescence-based measurement and an approach to challenge https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0022175914003524 Journal of Immunological Methods en 416 1–16 10.1016/j.jim.2014.11.011 0022-1759 इम्यूनोफ्लोरेसेंस को फ्लोरोसेंट स्टेनिंग के अन्य गैर प्रतिरक्षी के साथ संयोजन करके उपयोग किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, डीएनए को लेबल करने के लिए DAPI का उपयोग करके. इम्यूनोफ्लोरेसेंस के नमूनों का विश्लेषण करने के लिए कई सूक्ष्मदर्शी डिजाइनों का उपयोग किया जाता है; इनमें से सबसे सरल है एपीफ्लोरेसेंस सूक्ष्मदर्शी और कोंफोकल सूक्ष्मदर्शी हमेशा व्यापक रूप से प्रयोग की जाती है। विभिन्न सुपर-रिजॉल्यूशन सूक्ष्मदर्शी डिजाइन जो और अधिक उच्च परिणाम देने में सक्षम हैं, उनका उपयोग भी किया जा सकता है।http://www.bio.davidson.edu/Courses/genomics/method/IMF.html इम्यूनोफ्लोरेसेंस विधि 4 जनवरी 2011 https://web.archive.org/web/20161228112201/http://www.bio.davidson.edu/Courses/genomics/method/IMF.html 28 दिसंबर 2016 live इम्यूनोफ्लोरेसेंस के प्रकार इम्यूनोफ्लोरेसेंस तकनीक के दो वर्ग होते हैं, प्राथमिक (या प्रत्यक्ष) और द्वितीयक (या अप्रत्यक्ष)। प्राथमिक (प्रत्यक्ष) प्राथमिक, या प्रत्यक्ष, इम्यूनोफ्लोरेसेंस एक एकल प्रतिरक्षी का उपयोग करता है जो एक फ्लोरोफोरे के साथ रासायनिक तरीके से जुड़ी हुई होती है। यह प्रतिरक्षी लक्ष्य अणु को पहचानता है और उसे बांधता है और एक सूक्ष्मदर्शी के माध्यम से उसमें मौजूद फ्लोरोफोरे का पता लगाया जा सकता है। निम्नलिखित द्वितीयक (या अप्रत्यक्ष) प्रोटोकॉल के मुकाबले इस तकनीक के कई फायदे हैं जिसका कारण है फ्लोरोफोरे के साथ प्रतिरक्षी का प्रत्यक्ष संयोजन. यह स्टेनिंग प्रक्रिया के कई चरणों को कम कर देता है और इसलिए यह तेज़ है और यह प्रतिरक्षी विपरीत प्रतिकार या गैर विशिष्टता के साथ कुछ मुद्दों से बच सकते हैं, जो पृष्ठभूमि संकेत में वृद्धि की अगुवाई करता है। द्वितीयक (अप्रत्यक्ष) द्वितीयक, या अप्रत्यक्ष, इम्यूनोफ्लोरेसेंस दो प्रतिरक्षियों का उपयोग करता है, पहला (प्राथमिक प्रतिरक्षी) जो लक्ष्य अणु को पहचानता है और उससे बंधता है और दूसरा (द्वितीयक प्रतिरक्षी), जो फ्लोरोफोरे को वहन करता है, प्राथमिक प्रतिरक्षी की पहचान करता है और उससे बंधता है। यह प्रोटोकॉल, उपर्युक्त प्राथमिक (या प्रत्यक्ष) से अधिक जटिल है और इसमें अधिक समय लगता है लेकिन यह अधिक लचीलापन प्रदान करता है। यह प्रोटोकॉल इसलिए संभव है क्योंकि एक प्रतिरक्षी में दो भाग होते हैं, एक परिवर्तनीय क्षेत्र (जो एंटीजेन को पहचानता है) और एक अपरिवर्तनीय क्षेत्र (जो प्रतिरक्षी अणु की संरचना करता है)। एक शोधकर्ता कई प्राथमिक प्रतिरक्षी उत्पन्न कर सकता है जो विभिन्न एंटीजनों की पहचान करता है (जिसमें विभिन्न परिवर्तनीय क्षेत्र है), लेकिन सभी एक ही अपरिवर्तनीय क्षेत्र को सांझा करते हैं। इसलिए यह सभी प्रतिरक्षी एक एकल द्वितीयक प्रतिरक्षी द्वारा पहचान लिए जाते हैं। यह प्राथमिक प्रतिरक्षी को प्रत्यक्ष रूप से एक फ्लोरोफोरे वहन करने के लिए संशोधित करने की लागत को बचाता है। अपरिवर्तनीय क्षेत्रों वाले विभिन्न प्राथमिक प्रतिरक्षी आम तौर पर अलग-अलग प्रजातियों में प्रतिरक्षी को उगाने के द्वारा उत्पन्न होते हैं। उदाहरण के लिए, एक शोधकर्ता एक बकरी में प्राथमिक प्रतिरक्षी पैदा कर सकता है जो कई एंटीजनों की पहचान करता है और तब डाई-युग्मित खरगोश की द्वितीयक प्रतिरक्षी को शामिल करता है जो बकरी की प्रतिरक्षी अपरिवर्तनीय क्षेत्र की पहचान करता है ("खरगोश गैर-बकरी" प्रतिरक्षी)। शोधकर्ता तब एक चूहे में प्राथमिक प्रतिरक्षी का एक दूसरा सेट तैयार करते हैं जिसे एक अलग "गधा गैर-चूहा" द्वितीयक प्रतिरक्षी द्वारा पहचाना जा सकता है। यह बनाने-में-मुश्किल डाई-युग्मित प्रतिरक्षियों के कई परीक्षणों में पुनः उपयोग को सम्भव बनाता हैं। सीमाएं जैसा की अधिकांश प्रतिदीप्ति तकनीकों के मामले में है, इम्यूनोफ्लोरेसेंस के साथ एक महत्वपूर्ण समस्या फोटोब्लीचिंग है। प्रकाश अनावरण की तीव्रता या समय काल को कम करके, फ्लोरोफोरेस के घनत्व को बढ़ाने के द्वारा, या ब्लीचिंग के प्रति कम सम्वेदनशील अधिक ठोस फ्लोरोफोरेस के प्रयोग द्वारा (जैसे, अलेक्सा फ्लोरस, सेटा फ्लोरस, या डाईलाईट फ्लोरस) के द्वारा फोटोब्लीचिंग की वजह से हुए गतिविधियों के नुकसान को नियंत्रित किया जा सकता है। सामान्यतः, इम्यूनोफ्लोरेसेंस निश्चित नमूने (अर्थात् मृत,) तक सीमित हैं। इम्यूनोफ्लोरेसेंस के द्वारा जीवित कोशिकाओं के भीतर की संरचना के विश्लेषण संभव नहीं है, चूंकि प्रतिरक्षी कोशिका झिल्ली को पार नहीं कर सकते. वैसे इम्यूनोफ्लोरेसेंस के कुछ उपयोगों को, फ्लोरोसेंट प्रोटीन डोमेन युक्त पुनः संयोजक प्रोटीन के विकास द्वारा अप्रचलित कर दिया गया, उदाहरण के तौर पर हरा प्रतिदीप्ति प्रोटीन (GFP)। इस तरह के "टैग किए हुए" प्रोटीन का इस्तेमाल जीवित कोशिकाओं में उनके स्थानीयकरण को निर्धारित करने को सम्भव करता है। सन्दर्भ बाहरी कड़ियाँ ऑटोइम्यून रोगों से जुड़े चित्र https://web.archive.org/web/20090925190032/http://www.ii.bham.ac.uk/clinicalimmunology/CISimagelibrary/ 25 सितंबर 2009 बर्मिंघम विश्वविद्यालय में इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रोटोकॉल और कोंफोकल सूक्ष्मदर्शी संसाधन https://web.archive.org/web/20110516213017/http://www.confocal-microscopy.org/Protocols%20-%20Immunofluorescence.htm 16 मई 2011 कोंफोकल-माइक्रोस्कोपी.ओर्ग में इम्यूनोफ्लोरेसेंस स्टेनिंग प्रोटोकॉल https://web.archive.org/web/20080821125921/http://www.prosci-inc.com/Immunofluorescence-Protocol.html 21 अगस्त 2008 सिंहावलोकन https://web.archive.org/web/20161228112201/http://www.bio.davidson.edu/Courses/genomics/method/IMF.html 28 दिसंबर 2016 डेविडसन कॉलेज में Immunofluorescence ओपनवेटवेयर https://web.archive.org/web/20110106012144/http://openwetware.org/wiki/Griffin:Immunofluorescence_Cell_Staining 6 जनवरी 2011 श्रेणी:प्रतिरक्षा विज्ञान श्रेणी:जैविक तकनीक और उपकरण श्रेणी:शरीररचना संबंधी पैथोलॉजी